Turk Hij Den Biyol Derg. 2007; 64(2): 26-33

İnsan Servikal Karsinoma Hücre Dizisinde Nitrik Oksit İle Yönlendirilen Hücre Ölümü Üzerinde Hidrojen Peroksidin Etkisi

Yasemin Baskın¹, Nur Olgun^2
1Refik Saydam Hıfzıssıhha Merkezi Başkanlığı, İzmir Bölge Hıfzıssıhha Enstitüsü Müdürlüğü, İzmir
²Dokuz Eylül Üniversitesi, Onkoloji Enstitüsü, İzmir

AMAÇ: Nitrik oksit (NO) ve reaktif oksijen türleri (ROT) gibi organ mikrocevre faktörleri ve onların apoptoz ile etkileşimleri, normal hücrelerin ve kanser hücrelerinin davranışlarım etkileyebilir. Bu olasılık sağaltım stratejileri için yeni hedefler sağlayabilir. NO'nın tümör hücresinin yaşamını sürdürmesi, redoks homeostazı; tümör hücrelerinin genetik ve epigenetik yapılanması gibi olaylarda rolü bulunmaktadır. Bu çalışmada NO'nın yönlendirdiği hücre ölümünde ROT'un [Hidrojen peroksit (H202) ile taklit edilmiştir] etkileri araştırılmıştır.
YÖNTEMLER: İnsan servikal karsinoma hücre dizisi (HeLa); Dulbecco's Minimum Essential Medium (DMEM) ile üretilmiştir. Hücrenin yasamı ve proliferasyonları, niceleyici koloritmetrik bir 3 (4,5 dimetiltiyazol- 2 iî)-2,5- difenil tetrazolyum bromid (MTT) deneyi ile taranmıştır. DNA'ya bağlanan boya Hoechst 33342 (HOE 33342) ve propidyum iyodid (Pl), nükleer morfoloji ve membran bütünlüğünün kantifikasyonu ve mikroskopik identifikasyonu için ayırt edici boya çalışması olarak kullanılmıştır.

BULGULAR: HeLa hücreleri yalnızca L-arjinin (NO uyarıcısı) ile uyarıldığında (NO grubu) % 66± 9.2 hücre ölmüş ve ölen bu hücrelerin % 51±7.3'ü "apoptotik yolak"tan geçerek olmuştur. NO, H202 varlığında '(peroksi nitrit grubu) uyarıldığında daha fazla hücre ölmüş (% 98.3±1.7) ve bu ölümler "nekrotik yolak"tan geçerek olmuştur (% 69.3±5.7). Hücreler H202 ile uyarıldığında (peroksit grubu) bütün hücreler ölmüş (% 99.3±4.1) ve hücresel ölüm "nekrotik yolak" üzerinden olmuştur (%85±6.9).

SONUÇ: HeLa hücrelerinde L-arjinin (L-arg) ve H202'nin hücresel Ölümü belirgin olarak, fakat farklı yolaklardan giderek arttırdıkları görülmüştür. Ancak birlikte kullanıldıklarında, H202'nin, L-arg'in yarattığı hücresel ölümü "apoptotik yolak"tan, "nekrotik yolak"a çevirdiği gözlemlenmiştir.

Anahtar Kelimeler: Nitrik oksit, hidrojen peroksit, kanser mikrocevresi, apoptoz, nekroz, servikal karsinoma hücre dizisi.

---

Effects of Hydrogen Peroxide on Nitric Oxide Mediated Cellular Death in Human Cervical Carcinoma Celi Line

Yasemin Baskın¹, Nur Olgun^2
1Refik Saydam Hıfzıssıhha Merkezi Başkanlığı, İzmir Bölge Hıfzıssıhha Enstitüsü Müdürlüğü, İzmir
²Dokuz Eylül Üniversitesi, Onkoloji Enstitüsü, İzmir

OBJECTIVE: Organ microenvironment factors such as nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS), and their interactions with apoptosis may influence the behavior of normal and cancer cells. This possibility may provide new targets for therapy strategies. The effect of NO on tumor celi survival is influenced by multiple factors, including the levels of redox homeostasis, and genetic and epigenetic make up of tumor cells. The effects of ROS [mimicked by hydrogen peroxide(H202)] on NO-mediated cellular death were examined in this study.
METHODS: Human cervical carcinoma celi line (HeLa) was grown using Dulbecco's Minimum Essential Medium (DMEM). Celi survival and proliferations were determined by a quantitative colorimetricMTTassay. The DNAbindingdye Hoechst 33342 and propidium iodide (HOE/PI) were used together in a differential dye uptake assay for microscopic identification and quantification of membrane integrity and nuclearmorphology.
RESULTS: When HeLa cells wereinduced by L-arginine (NO inducer) alone (nitric oxidegroup), 66 ±9,2% of cells died, and of these cells 51 ± 7,3 % died through an "apoptotic pathway". We found that when NO was induced in the presence of H202 (peroxynitrite group), more cells died (98, 3 ± 1, 7 %) through a "necrotic pathway" (69, 3 ± 5, 7 %). When cells were induced by hydrogen peroxide (peroxide group) ali cells died (99, 3 ±4,1 %) and cellular death was through a "necrotic pathway" (85 ± 6, 9 %).

CONCLUSION: İn HeLa cells L-arginine (L-arg) and H202 significantly increased cellular death but in distinct pathways. But when treated together the presence of H202 shifted cellular death caused by L-arg from apoptotic pathway to necrotic pathway.

Keywords: Nitric oxide, hydrogen peroxide, cancer microenvironment, apoptosis, necrosis, cervical carcinoma celi line.

---