Çiğ sütlerden izole edilen bazı Pseudomonas bakterilerinin proteolitik, lipolitik aktivitelerinin ve antibiyotik duyarlılıklarının araştırılması

AMAÇ: Pseudomonas bakterileri proteaz ve lipaz gibi yüksek sıcaklıklarda kararlı ekstraselüler enzimleri sentezlerler. Bu nedenle Pseudomonas türleri çiğ veya pastörize sütte bozulmadan sorumlu en yaygın organizmalardır. Bu çalışmanın amacı, çiğ sütlerden izole edilen 15 adet Pseudomonas suşunun antibiyotik duyarlılığı, proteolitik ve lipolitik aktivitelerini belirlemektir.

YÖNTEMLER: Bu çalışmada incelenen 15 adet Pseudomonas spp. suşu Türkiye’de Kayseri ve Niğde illerinden toplanan 50 adet çiğ süt örneğinden izole edilmiştir. Örnekler, laboratuvara transfer edilene kadar düşük sıcaklıkta muhafaza edilmiş ve 24 saat içerisinde analize alınmıştır. İzole edilen suşlar Analitik Profil İndeks (API 20 NE) kullanılarak tanımlanmıştır. Pseudomonas suşlarının proteolitik ve lipolitik aktiviteleri Skim Milk Agar (SMA) ve Tribütirin Agar (TA) besiyerlerinde test edilmiştir. Bir gecelik kültürlerden besiyerlerine nokta ekim yapılmıştır. İnkübasyondan sonra SMA ve TA besiyerlerinde oluşan zonlar kumpas ile ölçülmüştür. Aynı zamanda, suşların yedi antibiyotiğe karşı duyarlılıkları test edilmiştir. Pseudomonas spp suşlarının antibiyotiklere karşı duyarlılığı ampisilin (10 μg), amikasin (30 μg), gentamisin (10 μg), oflaksasin (5 μg), tetrasiklin (30 μg), kloramfenikol (30 μg) ve sefuroksim (30 μg) antibiyotikler için disk difüzyon yöntemi kullanılarak belirlenmiştir. Sonuçlar CLSI standartlarına göre yorumlanmıştır.

BULGULAR: Proteolitik aktiviteye sahip olduğu saptanan 14 Pseudomonas suşunun bu aktivitelerinin 14,2 ve 55,0 mm zon çapları arasında olduğu bulunmuştur. Lipolitik aktivite gösteren 13 suşun aktivitelerinin 5,3 ve 29,3 mm zon çapları arasında olduğu bulunmuştur. Test edilen Pseudomonas suşlarının %57’sinin antibiyotiklere karşı duyarlı, %35’inin dirençli ve %8’sinin orta duyarlı olduğu belirlenmiştir.

SONUÇ: Çalışmamız ilaç sanayi ve diğer sektörlerde kullanılan mikrobiyal enzimlerin saflaştırılması ve ekonomik faydalarına yönelik konulara ışık tutacaktır.

Investigation of proteolytic, lipolytic activities and antibiotics susceptibility of some Pseudomonas bacteria isolated from raw milks

OBJECTIVE: Pseudomonas bacteria secrete extracellular enzymes, extremely stable to high temperatures such as protease and lipase. Accordingly, Pseudomonas species are the most common organisms in raw or pasteurized milk at the time of spoilage. The aim of this study was to determine antibiotic sensitivity, proteolitic and lipolytic activity of fifteen Pseudomonas spp. strains isolated from raw milk samples.

METHODS: In the study, 15 Pseudomonas spp. strains were isolated from 50 raw milk samples collected from Kayseri and Nigde provinces in Turkey. The samples were maintained at low temperature during transfer to the laboratory and analyzed within 24 hrs. Isolated strains were identified by using Analytical Profile Indeks (API 20 NE). Proteolytic activities and lipolytic activities of Pseudomonas strains were tested in Skim Milk Agar (SMA) medium and in Tributyrin Agar (TA) medium. Overnight cultures were spot inoculated onto media. After incubation, the transparent zones of bacteria on the SMA and TA media were measured by calper rule. Also, the Pseudomonas spp. strains were tested for their susceptibility to seven antibiotics. Antibiotic susceptibility tests of Pseudomonas spp. strains to ampicillin (10 μg), amikacin (30 μg), gentamicin (10 μg), oflaxacin (5 μg), tetracyclin (30 μg), chloramphenicol (30 μg), cefuroxime (30 μg) were determined by using the disc diffusion method. The results were described according to CLSI standards.
RESULTS: Fourteen Pseudomonas strains were determined that had proteolytic activities. Proteolytic activities of these strains were found between 14.2 and 55.0 mm zone diameters. Thirteen strains showed lipolytic activities. Lipolytic activities of these strains were found between 5.3 and 29.3 mm zone diameters. It was determined that 57% of Pseudomonas strains were susceptibility, 35% were resistant and 8% were intermediate susceptibility against antibiotics.

CONCLUSION: Our study shed light on purification and economic benefits of microbial enzymes used in the pharmaceutical industry and other sectors.