Eosin Y boyama testi ile sperm vitalite değerlendirmesi

GİRİŞ ve AMAÇ: Bu çalışmada, membran bütünlüğü esasına dayanan su bazlı Eosin Y boyaması ile sperm hücre canlılığının ışık mikroskobunda değerlendirilmesi, bu yöntemin in vitro hizmet laboratuvarlarında uygulanabilirliğinin araştırılması ve 5. ile 30. dakika vitalite değerlerinin incelenmesi amaçlanmıştır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Çalışmada hastanemize çeşitli nedenlerle başvuran 46 hastaya ait semen örnekleri dahil edildi. Tüm hastaların semen incelemesi SQA-V Gold sisteminde yapıldı. Likefaksiyon sonrası ilk 5 dakika içinde ve 30. dakikada tüm örnekler Eosin Y ile boyanıp lam lamel arası 400x büyütmede 200 sperm hücresi sayılarak vitalite yüzdesi belirlendi. Çalışmada manuel Makler® Sperm Sayma Kamarası ve otomatize SQA-V Gold (Mes Electronic System) sistemi kullanıldı.

BULGULAR: Çalışmada hastaların yedisinde (%15,2) toplam sperm motilitesi %40’ın altındaydı. Ortalama toplam sperm motilitesi %57,2±19,9; ortalama ileri motilite %38,3±20,8 idi. 5. dakika ortalama sperm vitalitesi %81,9±14,3; 30. dakika ortalama vitalite %74,6±12,5 idi. Ortalama 30. dakika vitalitesi / 5. dakika vitalitesi oranı %86,3±6,7 olarak saptandı. Toplam sperm motilitesi %40’ın üzerinde olanlarda ortalama 5. dakika (p=0,01) ve 30. dakika (p=0,02) sperm vitalitesi anlamlı yüksek bulundu. Ortalama sperm konsantrasyonu (p=0,553) ve ortalama 30. dakika / 5. dakika vitalite oranları (p=0,156) gruplar arasında benzerdi. Boya değerlendirme zamanı 5 dakikadan 30 dakikaya çıkınca vitalitede anlamlı seviyede düşme gözlendi (p=0,001). Yapılan korelasyon analizinde toplam motilite ile 5. dakika (p<0,001; r=0,686) ve 30. dakika (p=0,035; r=0,499) vitaliteleri arasında pozitif yönlü anlamlı korelasyon saptandı.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Çalışmamız su bazlı Eosin Y boyası ile yapılan vitalite testinin kolay ve tercih edilebilir bir yöntem olduğunu göstermiştir. Çalışmamızda elde edilen bulgular sperm motilitesinin sperm vitalitesini yansıtmakta önemli olduğunu ancak buna rağmen hareketsiz spermlerin bile çoğunluğunda vitalitenin devam ettiğini, infertilitenin araştırılmasında sperm vitalite testinin yapılmasının kritik öneme sahip olduğunu göstermektedir. Bulgularımız ayrıca 5. dakikadaki incelemeden sonra 30. dakikaya kadar sperm vitalite oranında belirgin bir düşüş olduğunu, ancak buna rağmen 30. dakikadaki vitalite incelemesinin de infertilitenin saptanması açısından önemli bilgiler sağladığını göstermektedir. Çalışmamızda ek olarak kullanılan 30. dakika / 5. dakika vitalite oranı belirteci 30. dakikadaki vitalite oranının 5. dakikadaki vitalitenin tahmin edilmesinde kullanılabileceğini işaret etmektedir.

Anahtar Kelimeler: Sperm vitalite, eosin Y, motilite

Eosin Y staining test for sperm vitality assessment

INTRODUCTION: This study aimed to evaluate sperm cell viability using water-based Eosin Y staining based on membrane integrity under light microscopy, to investigate the applicability of this method in routine laboratory settings, and to examine the viability values at 5 and 30 minutes.
METHODS: Semen samples from 46 patients who presented to our hospital for various reasons were included in the study. Semen analysis for all patients was performed using the SQA-V Gold system. After liquefaction, all samples were stained with Eosin Y within the first 5 minutes and at 30 minutes. The viability percentage was determined by counting 200 sperm cells at 400x magnification between slide and coverslip. The study utilized the manual Makler® Sperm Counting Chamber and the automated SQA-V Gold (Mes Electronic System).
RESULTS: In the study, seven patients (15.2%) had a total sperm motility below 40%. The mean total sperm motility was 57.2% ± 19.9%, and the mean progressive motility was 38.3% ± 20.8%. The mean sperm viability at 5 minutes was 81.9% ± 14.3%, and at 30 minutes, it was 74.6% ± 12.5%. The mean 30-minute to 5-minute viability ratio was determined as 86.3% ± 6.7. Significantly higher sperm viability was found at both 5 minutes (p=0.01) and 30 minutes (p=0.02) in those with total sperm motility above 40%. Mean sperm concentration (p=0.553) and mean 30-minute to 5-minute viability ratios (p=0.156) were similar between groups. A significant decrease in viability was observed when the staining assessment time increased from 5 minutes to 30 minutes (p=0.001). Correlation analysis revealed a significant positive correlation between total motility and viability at 5 minutes (p<0.001; r=0.686) and 30 minutes (p=0.035; r=0.499).
DISCUSSION AND CONCLUSION: Our study demonstrated that the viability test using water-based Eosin Y stain is an easy and preferable method. Our findings suggest that sperm motility is an important indicator of sperm viability, but even immotile sperm may still remain viable in the majority of cases. Therefore, the sperm viability test is crucial in investigating infertility. Furthermore, our results indicate a significant decrease in sperm viability rates between 5 minutes and 30 minutes, while also demonstrating the importance of evaluating viability at 30 minutes for infertility diagnosis. Additionally, the 30-minute to 5-minute viability ratio marker suggests that the viability rate at 30 minutes can be used to predict viability at 5 minutes.

Keywords: Sperm viability, eosin Y, motility