HBV endemik bölgede serum HBV DNA düzeylerinin klinik önemi ve serolojik işaretler, ALT, AST ile ilişkisi

GİRİŞ ve AMAÇ: Bu çalışmanın amacı, HBV infeksiyonunun son derece yaygın olduğu Anadolu’nun Güneydoğu bölgesindeki büyük şehirlerden birinde HBV DNA polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) testi için mikrobiyoloji laboratuvarına örnekleri gönderilen hastalarda, demografik özellikler ve serolojik belirteçler, karaciğer enzimleri ve HBV DNA seviyeleri arasındaki ilişkileri incelemektir.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Ekim 2009-Ekim 2010 tarihleri arasında Şanlıurfa Eğitim ve Araştırma Hastanesinde viral hepatitin rutin testlerinin bir parçası olan HBV DNA PCR testi için1662 hastanın kan örneği laboratuvarımıza gönderildi. Bu örneklerde eş zamanlı olarak hepatit belirteçleri (HBsAg, HBeAg, anti-HBs and anti-HBc IgM) ve karaciğer fonksiyon enzimleri (ALT, AST) çalışıldı.
HBsAg, HBeAg, anti-HBs ve anti-HBc IgM seviyeleri chemiluminescent microparticle immunoassay yöntemi ile (Architect i2000 SR, Abbott, Ireland) çalışıldı.
ALT ve AST seviyeleri Roche Modular P ve Roche Integra otoanalizatörde (Roche Diagnostics Mannheim, Germany) ticari kitler ile ölçüldü.
HBV DNA PCR: Serum örneklerinde HBV DNA’nın izolasyonu M24sp otomatize ekstraksiyon cihazı (Abbott, USA) ile yapıldı. Saflaştırılmış DNA Abbott m2000 sample preparation system (Abbott, USA) yardımı ile Real-Time PCR yöntemi ile DNA amplifikasyonu yapıldı.
BULGULAR: Çalışmamızda ortalama yaş 33,7(Min-Max: 0-89) ve örneklerin çoğunluğu erkek cinsiyettedir (Erkek/Kadın; 1103/559). Hastaların %96.2’ının HBsAg’si pozitifti ve bu hastaların ortanca ALT seviyesi 94U/L(Min-Max: 4-2390 U/L) iken, ortanca AST seviyesi 74 U/L(Min-Max: 7-2505 U/L)’dir. HBsAg pozitif hastaların %94.6’sında HBV DNA pozitif ve ortanca HBV DNA düzeyi 3.9x104 copies/ml(Min-Max: 35-3.4x109 copies/ml)’dir. HBsAg pozitif hastaların %17.1’inde HBeAg pozitif idi. HBsAg negatif hastaların (%3.8) ortalanca ALT ve AST düzeyleri sırasıyla 32 U/L(Min-Max: 7-497 U/L) ve 33 U/L(Min-Max: 13-280 U/L)’dir. HBV DNA hastaların sadece %7.9’unda pozitifti ve ortanca HBV DNA seviyesi 155 copies/ml(Min-Max: 34-624 copies/ml) idi. HBsAg negatif ve HBV DNA pozitif hastaların %71.4’ünde HBeAg negatif bulundu. 1662 hastanın 26 (%1.6)’sında HBsAg ve Anti-HBs ‘nin her ikisi de negatif (N/N) idi. Bu N/N hastalarının sadece ikisi (%7.7) anti-HBc pozitif bulundu. İki anti-HBc pozitif hastanın ortalama ALT ve AST seviyeleri sırasıyla 29.5 U/L ve 30.5 U/L idi. Bu hastaların birinin HBV DNA’sı negatif idi ve diğeri 3×102 copies/ml ile pozitif bulundu.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Hepatit B infeksiyonlarının tanısında ve tedavisinin takibinde daha güvenilir sonuçlar elde edebilmek için daha sık kullanılan serolojik ve biyokimyasal testler ile birlikte kantitatif HBV DNA testleri kullanılmalıdır.

Determination of serum hepatitis B virus DNA in HBV endemic region: Clinical significance and correlation with serological markers, ALT and AST

INTRODUCTION: The aim of the this study is to investigate, demographics and the relationship between serologic markers, liver enzymes and HBV DNA levels from the patients whose samples were sent to microbiology laboratory for HBV DNA polymerase chain reaction(PCR) test, in one of the greatest cities of Southeastern region of Anatolia, where HBV infection is extremely common.
METHODS: Between October 2009 and October 2010, blood samples of 1662 patients were sent to our laboratory for HBV DNA PCR testing as part of a routine examination for viral hepatitis in Şanlıurfa Training and Research Hospital, Turkey. Hepatitis markers(HBsAg,HBeAg,anti-HBs,anti-HBc IgM) and liver function enzymes(ALT,AST) are tested simultaneously in these samples.
HBsAg, HBeAg, anti-HBs and anti-HBc IgM levels were assessed with chemiluminescent microparticle immunoassay method (Architect-i2000 SR, Abbott,Ireland).
ALT and AST levels were measured with commercial kits in Roche Modular-P and Roche-Integra autoanalysator (Roche Diagnostics Mannheim,Germany).
HBV DNA PCR: Isolation of HBV DNA from serum samples was done with M24sp automated extraction device (Abbott,USA). Purified DNA was amplified with Real-Time PCR method with the help of Abbott-m2000 sample preparation system (Abbott,USA).

RESULTS: The mean age was 33.7(Min-Max: 0-89) years old and the majority of the patients were male gender(Male/Female;1103/559) in the study. HBsAg was positive in 96.2% of the patients and the median ALT level of these patients were 94 U/L(Min-Max: 4-2390 U/L), while median AST level was 74 U/L(Min-Max: 7-2505 U/L). HBV DNA was positive in 94.6% of HBsAg positive patients and the median HBV DNA level was 3.9x104 copies/ml(Min-Max: 35-3.4x109 copies/ml). HBeAg was positive in 17.1% of HBsAg positive patients. Median levels of ALT and AST in HBsAg negative patients(3.8%) were 32 U/L(Min-Max: 7-497 U/L) and 33 U/L(Min-Max: 13-280 U/L) respectively. HBV DNA was positive in only 7.9% of the patients with median HBV DNA level of 155copies/ml(Min-Max: 34-624 copies/ml). HBeAg was found negative in 71.4% of patients with negative HBsAg and positive HBV DNA. In 26 of 1662 patients(1.6%), both HBsAg and Anti-HBs were negative(N,N). Only two of the N/N patients(7.7%) were found anti-HBc positive. Mean ALT and AST levels of the two the anti-HBc positive patients were 29.5U/L and 30.5U/L respectively. HBV DNA was negative in one of these patients, and the other was found positive with a level of 3×102copies/ml.
DISCUSSION AND CONCLUSION: To acquire more reliable results on the diagnosis and follow-up of the treatment of Hepatitis B, quantitative HBV DNA tests should be used in together with more frequently used serologic and biochemical methods.